independente da metodologia utilizada, o frasco de hemocultura, inoculado com o sangue coletado do paciente, deve ser transportado ao laboratório sempre sob refrigeração. 

a coleta do sangue para hemocultura deve ser realizada durante o pico febril, em pacientes estáveis.

quanto maior o volume de sangue coletado, melhor será a sensibilidade da hemocultura, desde que respeitada a proporção sangue/meio de cultura.

considerando-se que a grande maioria dos patógenos pode ser isolada em até 48 horas, recomenda-se um período de incubação dos frascos de até 3 dias para a metodologia automatizada e de até 5 dias, para a manual.

em hemoculturas realizadas através da metodologia manual, os meios de cultura utilizados geralmente contêm o anticoagulante EDTA.