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O sistema CRISPR-Cas9 utiliza uma molécula de RNA-guia para direcionar a enzi...

O sistema CRISPR-Cas9 utiliza uma molécula de RNA-guia para direcionar a enzima Cas9 até uma região do DNA. O reconhecimento depende do pareamento entre bases do RNA e da sequência-alvo, além da pr...


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O sistema CRISPR-Cas9 utiliza uma molécula de RNA-guia para direcionar a enzima Cas9 até uma região do DNA. O reconhecimento depende do pareamento entre bases do RNA e da sequência-alvo, além da presença de uma sequência adjacente denominada PAM. Depois da clivagem, os mecanismos celulares de reparo atuam sobre o DNA e podem produzir a modificação genética pretendida.

DOUDNA, Jennifer A.; CHARPENTIER, Emmanuelle. The new frontier of genome engineering with CRISPR-Cas9. Science, v. 346, n. 6213, art. 1258096, 2014. DOI: 10.1126/science.1258096. Adaptado.

Em um experimento de edição gênica, pesquisadores utilizaram dois RNAs-guia direcionados à mesma região:

• o RNA-guia I apresentava complementaridade elevada com a sequência-alvo;
• o RNA-guia II possuía alterações em alguns nucleotídeos, mas conservava correspondência parcial com a sequência-alvo.

Após o tratamento, o sequenciamento revelou que ambos produziram modificações na região pretendida. Entretanto, nas células tratadas com o RNA-guia II, também foram encontradas alterações em outra região do genoma com sequência parcialmente semelhante ao alvo.

O resultado obtido com o RNA-guia II evidencia que
Analisando...
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  • David Castilho
    David Castilho EQUIPE
    09/10/2026 • 13:02
    Essa questão aborda o funcionamento do sistema CRISPR-Cas9, que é uma ferramenta poderosa para a edição gênica. O sistema utiliza uma molécula de RNA-guia que direciona a enzima Cas9 até a sequência específica do DNA que se quer modificar. A especificidade desse reconhecimento depende do pareamento entre as bases do RNA-guia e a sequência do DNA-alvo, além da presença da sequência PAM próxima à alvo.

    Quando o RNA-guia tem alta complementaridade, a Cas9 corta exatamente na região desejada, o que garante alta especificidade. Porém, quando o RNA-guia apresenta algumas diferenças (como no caso do RNA-guia II na questão), essa relativa complementaridade pode permitir que Cas9 também reconheça e corte em locais muito parecidos com o alvo, ocasionando alterações fora da região pretendida, chamadas de efeitos off-target.

    A situação descrita na questão mostra que o RNA-guia II, por não ter uma complementaridade perfeita, levou a modificações em outra região com sequência parcialmente semelhante, reduzindo a especificidade do sistema.

    Desse modo, a alternativa correta é a (b), que explica que a complementaridade parcial compromete a especificidade, gerando modificações fora do alvo.

    As demais alternativas ou contradizem o mecanismo conhecido do CRISPR (como ampliar a atividade catalítica indiscriminada, cortar RNA em vez de DNA, excluir importantes etapas do processo, ou afirmar que não houve associação com Cas9) não são adequadas à realidade do sistema.
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