O sistema CRISPR-Cas9 utiliza uma molécula de RNA-guia para direcionar a enzima Cas9 até uma região do DNA.
O reconhecimento depende do pareamento entre bases do RNA e da sequência-alvo, além da presença de uma
sequência adjacente denominada PAM. Depois da clivagem, os mecanismos celulares de reparo atuam sobre o DNA
e podem produzir a modificação genética pretendida.
DOUDNA, Jennifer A.; CHARPENTIER, Emmanuelle. The new frontier of genome engineering with CRISPR-Cas9. Science, v. 346, n. 6213,
art. 1258096, 2014. DOI: 10.1126/science.1258096. Adaptado.
Em um experimento de edição gênica, pesquisadores utilizaram dois RNAs-guia direcionados à mesma região:
• o RNA-guia I apresentava complementaridade elevada com a sequência-alvo;
• o RNA-guia II possuía alterações em alguns nucleotídeos, mas conservava correspondência parcial com a sequência-alvo.
Após o tratamento, o sequenciamento revelou que ambos produziram modificações na região pretendida. Entretanto, nas células
tratadas com o RNA-guia II, também foram encontradas alterações em outra região do genoma com sequência parcialmente
semelhante ao alvo.
O resultado obtido com o RNA-guia II evidencia que